抗熒光衰減封片劑的作用和使用方法介紹
更新時間:2021-10-13 點擊次數:1283次
抗熒光衰減封片劑是在進行熒光顯微鏡觀察時,用于對熒光組織和細胞樣品的封片。封片劑以高純度甘油為介質,內含抗熒光淬滅劑,有強烈的抗熒光衰減作用。樣品最大限度延長熒光持續時間和維持熒光發光強度,同時封片劑中的其它成分有助于保持組織抗原抗體處于結合狀態,適用于所有光譜范圍的熒光,能用于各種組織、細胞免疫熒光染色的自發熒光消除,特別適用神經組織自發熒光淬滅。
許多組織會產生可透過各種波長濾光片的內源性自發熒光,顯著干擾抗體標記熒光觀察甚至導致熒光組化染色失敗。抗熒光衰減封片劑中的離子可用碰撞方式捕獲自發熒光光源分子發出的電子,阻止該電子從激發態回歸基態并阻止能量釋放,從而淬滅自發熒光。采用優化的孵育時間,可以最大限度地消除自發熒光而不明顯影響抗體標記的熒光。封片溶液成分無特殊毒性。如蓋玻片脫落或錯位,可將玻片放入PBS中取出蓋玻片,重新用封片劑封片。也可將適量封片劑直接加到細胞培養孔內,進行熒光觀察。
抗熒光衰減封片劑使用方法:
1.吸去載玻片上的液體,略微晾干殘留液體。
2.取封片劑滴加在載玻片樣品處,也可直接加到細胞培養孔內觀察。
3.蓋上蓋玻片,輕輕壓蓋玻片,用濾紙小心吸除蓋玻片周圍多余液體,室溫放置數分鐘。
4.直接進行熒光顯微鏡觀察。